数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于传统 的 qPCR, 数字 PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。
数字 PCR是最新的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种绝对定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微滴化方法,将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微滴中,每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。
数字 PCR的 检测原理
数字 PCR的优势
无需标准品(标准曲线),对靶标分子实现 绝对定量
可以实现 0.01%或以上的突变检出率, 更高的灵敏度;
有效区分浓度差异(变化)微小的样品, 更高的精密度和重复性;
不依赖扩增效率,能克服 PCR抑制剂的影响,特别 适合基质复杂样本 的检测。
可检测样本及类型
土壤、水体、粪便、沉积物等样本中细菌、真菌等微生物绝对量
土壤、水体等样本的抗生素抗性基因的绝对量
土壤、沉积物等样本中碳循环、氮循环、硫循环等功能基因的绝对量